Kit de purificação de produtos de PCR em coluna (100 reações)

Kit de purificação de produtos de PCR em coluna (100 reações)

Kit de purificação de produtos de PCR em coluna (Kit para recuperação de produtos de PCR e mistura da PCR e fragmentos de DNA a partir de soluções de reação). Kit para 1

Componentes do Kit:

• Buffer BB: 50 ml
• Buffer WB (concentrado): 25 ml (adicionar etanol antes do primeiro uso)
• Buffer de Eluição: 15 ml
• Colunas e Tubos de Coleta: 100 unidades
• Protocolo: 1

Introdução:
O Kit de Purificação PCR utiliza o sal caotrópico guanidina tiocianato para ligar o DNA amplificado pela PCR a uma membrana de silício nas colunas de centrifugação. Após uma série de lavagens rápidas, contaminantes como primers, nucleotídeos e sais são removidos, e o DNA é eluído com uma solução de baixo sal. Esse método simples elimina a necessidade de extrações com solventes orgânicos e precipitação de DNA, permitindo purificação rápida de múltiplas amostras simultaneamente.

Características:

• Purificação de até 10 μg de produtos PCR, de 100 pb a 10 kb.
• Recuperação de até 95% de DNA pronto para uso.
• Limpeza de DNA de até 10 kb em três etapas simples.

Materiais fornecidos pelo usuário:

• Tubos de microcentrífuga (1,5 ml ou 2 ml) capazes de suportar pelo menos 12.000 × g
• Pipetas e ponteiras de pipeta
• Etanol livre de nucleases (96-100%)

Procedimento:

1. Adicione 5 volumes de Buffer BB para 1 volume da amostra PCR e misture. Não é necessário remover óleo mineral ou querosene.
2. Pipete a mistura na coluna de centrifugação colocada em um tubo de coleta de 2 ml. Centrifugue a 13.000 rpm por 30-60 segundos. Descarte o eluído e coloque a coluna de volta no mesmo tubo.
3. Adicione 600 μl de Buffer WB e centrifugue a 12.000 rpm por 30 segundos. Descarte o eluído.
4. Repita o passo 3 com mais 600 μl de Buffer WB.
5. Coloque a coluna de volta no tubo de coleta e centrifugue a 13.000 rpm por 2 minutos para remover completamente o etanol.
6. Coloque a coluna em um novo tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Adicione 50 μl de Buffer de Eluição (opcional: pré-aquecer a água a 70–90°C para aumentar o rendimento do DNA). Incube à temperatura ambiente por 2-3 minutos e centrifugue a 12.000 rpm por 1 minuto para eluir o DNA.

Observação:
Utilize um volume menor de Buffer de Eluição (mínimo 30 μl) para obter maior concentração de DNA. Você pode realizar a eluição novamente para aumentar a concentração do DNA em cerca de 10-15%.

Nota:
Antes do primeiro uso, adicione a quantidade indicada de etanol no Buffer WB, misture bem e marque a garrafa com uma verificação.